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木聚糖酶活性測(cè)定方法分享
  • 發(fā)布日期:2024-08-23      瀏覽次數(shù):150
    • 木聚糖是一種存在于植物細(xì)胞壁中的多糖類(lèi)物質(zhì),是植物半纖維素的主要成分。
      木聚糖酶分布廣泛,可以從動(dòng)物、植物及微生物體內(nèi)獲得。

      檢測(cè)原理:
      木聚糖酶可以將底物木聚糖降解為寡糖和單糖,具有還原性的寡糖和單糖在沸水浴的條件下,能夠和DNS試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。
      通過(guò)反應(yīng)溶液的顏色的變化,來(lái)確定還原糖的含量。
      因?yàn)檫€原糖的生成量和反應(yīng)液的木聚糖活力是成正比的,通過(guò)分光光度法可以測(cè)定,計(jì)算出樣品中的木聚糖酶活力。

      檢測(cè)所用的試劑:
      乙酸溶液、乙酸鈉溶液、氫氧化鈉溶液、乙酸-乙酸鈉緩沖溶液、木糖溶液、木聚糖溶液、DNS試劑。
      所需要的儀器設(shè)備:
      碾缽、分樣篩、分析天平、pH計(jì)、磁力攪拌器、電磁振蕩器、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)等。

      標(biāo)準(zhǔn)曲線:
      吸取乙酸-乙酸鈉緩沖溶液4ml,加入DNS試劑5ml,沸水浴加熱5min,用自來(lái)水冷卻至室溫,用水定容至25ml,制成標(biāo)準(zhǔn)空白樣。
      分別吸取木糖溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml,加入緩沖溶液定容至100ml,配制成0.1-0.7mg/ml的木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。
      按照上述的標(biāo)準(zhǔn)溶液配制,分別做2次平行。吸取木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液2ml,分別加入2ml水和5mlDNS試劑。
      電磁振蕩3s,沸水加熱5min,用自來(lái)水冷卻至室溫,用水定容至25ml。
      以標(biāo)準(zhǔn)空白樣作為對(duì)照,在540nm處測(cè)吸光度OD值。
      以木糖濃度為Y軸,吸光度OD值為X軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

      檢測(cè)過(guò)程:
      吸取10ml木聚糖溶液,37℃平衡10min。
      吸取10ml經(jīng)過(guò)稀釋的木聚糖酶溶液,37℃平衡10min。吸取2ml平衡過(guò)的木聚糖酶液,加入5mlDNS試劑,電磁振蕩3s。
      加入2ml木聚糖溶液,37℃保溫30min。沸水浴加熱5min,用自來(lái)水冷卻至室溫,加水定容至25ml,電磁振蕩3s。
      以標(biāo)準(zhǔn)空白樣為空白對(duì)照,在540nm處測(cè)定吸光度。以同樣的方法,加入2ml的木聚糖酶,電磁振蕩3s,37℃精確保溫30min,加入5mlDNS試劑,電磁震蕩3s,以終止酶解反應(yīng)。
      沸水浴加熱5min,用自來(lái)水冷卻至室溫,加水定容至25ml,振蕩3s,以標(biāo)準(zhǔn)空白樣為空白對(duì)照,在540nm處測(cè)定吸光度。